PPA制備與使用的基本技術(shù)
點(diǎn)擊次數:2522 更新時(shí)間:2014-12-29
PPA制備與使用的基本技術(shù)
- 將初步純化的SPA與HRP用過(guò)碘酸鈉氧化法(交聯(lián)反應時(shí)間在22℃下5h)交聯(lián)。
- 將上述PPA溶液過(guò)Sephadex G-100柱,條件同前。所收集的第1管至第22管的合并液,是PPA存在的主要組分,可用ELISA塑料平板法檢測活性。將合并液濃縮,然后加入30%左右甘油,貯于4℃冰箱備用
PPA的使用
- PPA-ELISA法?;旧吓cELISA法相同,PPA代替了酶標抗抗體。在進(jìn)行微量反應板測定時(shí),PPA常常加入0.1ml,稀釋度一般在1:2至1:100(應按不同情況試驗)。PPA與IgG是化學(xué)共價(jià)結合,反應時(shí)間不宜過(guò)長(cháng),不應超過(guò)2h,控制在30min-60min,反應時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )使PPA吸附到塑料載體上去。
- 用PPA進(jìn)行組織內有關(guān)抗原的定位。甲醛對PPA有顯色影響,因此組織不可用甲醛固定,可用甲醛、乙醇等。PPA對組織內抗原(先與IgG結合)的定位,反應時(shí)間可以延長(cháng),便于滲透入組織細胞內,且沒(méi)發(fā)現嚴重的物理吸附現象。
- 在PPA實(shí)驗中稀釋液常用含0.5%(v/v)Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液(2.42gTris溶于蒸餾水后用0.1N HC1調pH至7.4,然后加蒸餾水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20)。
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