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ELISAS實(shí)驗血清的制備
更新時(shí)間:2013-11-19 點(diǎn)擊次數:1752次

ELISAS實(shí)驗血清的制備

(2)抗血清的制備

 ① 所需的抗原量   一般1-10mg/mL。

②免疫途徑   抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜內注射、靜脈注射和淋巴結注射等。其中以靜脈注射zui為簡(jiǎn)單方便,不需要佐劑乳化,產(chǎn)生抗體的高峰值出現較早,一般在一周左右,注射后一周即可采血測試效價(jià)。免疫過(guò)程中應注意:a.佐劑只能現配現用:b.采血時(shí)間不宜拖得太長(cháng)。因為免疫時(shí)間越長(cháng),產(chǎn)生交叉反應的抗體也越多。

③抗血清的分離   當得到滿(mǎn)意的效價(jià)時(shí),即可進(jìn)行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過(guò)一夜。次日用滴管吸取抗血清,用離心法(2000-3000r/min,20min)去掉沉淀。然后測定效價(jià)、鑒定純度。純度用紫外分光光度計或Folin氏比色法進(jìn)行測定??寡灞4嬗?25℃低溫處。

 ④抗血清的效價(jià)測定    測定的方法一般有兩種,即試管沉淀法和免疫雙擴散法。對于免疫酶技術(shù)使用的抗血清,必須具有一定的效價(jià),試管沉淀法應不低于1:2,免疫雙擴散法不低于1:2,且要求單價(jià)抗血清。

 (3)捕食者的收集和準備     主要方法有3個(gè):①將胃內含物擠在質(zhì)量好的濾紙上,但蛋白質(zhì)易與纖維素結合,若保存過(guò)久則難以洗脫:②將待檢查的捕食封閉在明膠膠囊內,并加干燥劑,以使蟲(chóng)體與膠囊分離:③盡可能快地將采集到的捕食者儲存于低溫下(如-40℃)。前兩種方法適于郵寄和長(cháng)途運輸,后一種方法能保存較長(cháng)的時(shí)間。所有的方法都需保持干燥。對較大的捕食者,可將消化道分離,像蟻、蝸牛以及蜘蛛等小型動(dòng)物則整個(gè)蟲(chóng)體。(4)酶聯(lián)抗體的制備  按戊二醛簡(jiǎn)易法進(jìn)行。


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