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馬血管內皮細胞分離液試劑盒
馬血管內皮細胞分離液試劑盒
更新時(shí)間:2023-06-29
訪(fǎng)問(wèn)量: 1434
廠(chǎng)商性質(zhì): 生產(chǎn)廠(chǎng)家

本品用于分離馬血管內皮細胞
Store at: RT° C 試劑盒內容
試劑:全血及組織稀釋液 100ml
試劑:細胞洗滌液 100ml
試劑B: 100ml
試劑C: 100ml
試劑D: 100ml
說(shuō)明書(shū) 1份
試劑D: 100ml
說(shuō)明書(shū) 1份

馬血管內皮細胞分離液試劑盒產(chǎn)品概述:

馬血管內皮細胞分離液試劑盒

Store at:::RT 試劑盒規格

試劑盒內容:

全血及組織稀釋液 100ml

細胞洗滌液 100ml

試劑 B 100ml

試劑 C 100ml

試劑 D 100ml

說(shuō)明書(shū) 1

馬血管內皮細胞分離液試劑盒

1. 適用于人或各種動(dòng)物本系列產(chǎn)品檢索

2. 相關(guān)試劑及耗材

3. 注意事項

4. 應用

5. 產(chǎn)品性能指標

6. 貯藏及保存期限

7. 實(shí)驗前準備

8. 使用方法說(shuō)明及圖例

9. HES-TBD550 使用說(shuō)明

10. 組織單細胞懸液的制備

11. 生產(chǎn)企業(yè)

12. 參考文獻

1. 適用于人或各種動(dòng)物本系列產(chǎn)品檢索::::

B.... 耗材

貨號 名稱(chēng)及規格 生產(chǎn)廠(chǎng)商 價(jià)格

貨號          品牌              產(chǎn)品名稱(chēng)                            規格  價(jià)格

NK細胞分離液試劑盒    
NK2011HTBD人NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011RATTBD大鼠外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011RATPTBD大鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011MTBD小鼠外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011MPTBD小鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011RTBD兔外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011RPTBD兔臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011DTBD狗外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011DPTBD狗臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011BTBD牛外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011BPTBD牛臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011GTBD豚鼠外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011GPTBD豚鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011CTBD雞外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NK2011CPTBD雞臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NKHY2011MTBD猴外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NKHY2011MPTBD猴臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NKHY2011PTBD豬外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NKHY2011PPTBD豬臟器組織NK細胞分離液試劑盒4*50ml600
NKHY2011HTBD馬外周血NK細胞分離液試劑盒4*50ml600

 

3516 6 孔細胞培養板 50 / Costar 686.00

3513 12 孔細胞培養板 50 / Costar 675.00

3524 24 孔細胞培養板 100 / Costar 1287.00

3548 48 孔細胞培養板 100 / Costar 1542.00

3599 96 孔細胞培養板 100 / Costar 1367.00

430168 25CM 細胞培養瓶(密封蓋) 20 個(gè)/ Corning 113.00

430639 25CM 細胞培養瓶(透氣蓋) 20 個(gè)/ Corning 132.00

430720 75CM 細胞培養瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 56.00

430641 75CM 細胞培養瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 59.00

430823 150CM 細胞培養瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 102.00

430825 150CM 細胞培養瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 107.00

431079 175CM 細胞培養瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 133.00

431080 175CM 細胞培養瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 139.00

431081 225CM 細胞培養瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 167.00

431082 225CM 細胞培養瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 176.00

430790 15ml 離心管(含泡沫架) 50 / Corning 92.00

430828 50ml 離心管(含泡沫架) 25 / Corning 55.00

430776 250ml 離心管 102 / Corning 1176.00

4485 1ml 移液管 50 / Costar 55.00 www.tbdscience.com

4486 2ml 移液管 50 / Costar 63.00

4487 5ml 移液管 50 / Costar 92.00

430659 2ml 凍存管(可立外旋) 50 / Corning 117.00

430663 5ml 凍存管(可立外旋) 50 / Corning 131.00

GP2012 玻璃吸管 10 / TBD 30.00

GT201210 10ml 玻璃離心管 10 / TBD 90.00

GT201250 50ml 玻璃離心管 5 / TBD 120.00

L147 100/200 目不銹鋼濾網(wǎng) TBD 150.00

3. .. 注意事項

A 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過(guò)程中應在 18-25避光保存,啟封后置 4

℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于 10 以下易出現白色結晶,

影響分離效果。

B 待分離的樣品要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在 20水浴

箱中復溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20℃±2時(shí)分離效果,且所有操作

過(guò)程一定要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。

C 由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響

分離效果,用戶(hù)可以調節離心轉數,調節離心的時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件

各實(shí)驗室自定)。

D 使用無(wú)靜電反應的離心管,推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。

E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過(guò)程中應去除抗凝劑

體積。

 F 分離過(guò)程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及

紅細胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無(wú)菌、無(wú)病毒、無(wú)支原體、

低內毒素水平且無(wú)細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。

4. ..

適用于從人或各種動(dòng)物血液中分離內皮細胞。

5.. . . 產(chǎn)品性能指標

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg www.tbdscience.com

內毒素 0.5...EU/ml

無(wú)菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下,,,,含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下6.. . . 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

注::::若保證無(wú)微生物污染,啟封后可置 4長(cháng)期保存。但應注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。

7. .. 實(shí)驗前準備

A 試劑

內皮細胞分離液試劑盒所含試劑、組織勻漿液、胎牛血清

B 器材

玻璃離心管、玻璃滴管

水平轉子離心機、無(wú)菌工作臺

8.. . . 使用方法說(shuō)明及圖例 使用方法說(shuō)明及圖例

A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 B、C、D 三種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×108-1×109個(gè)/ml,具體制備方法參照“二、組織單細胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;

C. 400g(約1500/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉子); 此時(shí)離心管中由上至下細胞分為六層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;;;;為富含內皮細胞的 D 液層。。。。第三層;為 C 液層。第四層;為單個(gè)核細胞層。第五層;為 B 液層。第六層;為紅細胞層。收集第二層富含內皮細胞的 D 液層放入含 4-5ml 細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需內皮細胞。 沉淀細胞

注::::A. 提取率約為 80%。

9. HES. . HES-TBD550 使用說(shuō)明

HES 是從支鏈淀粉衍生出來(lái)的,是富含淀粉的復合物,其生理和化學(xué)特性主要由羥乙一基

取代度即取代級、平均分子量決定。大量實(shí)驗表明平均分子量越大對紅細胞的凝集作用越強,

有效提高紅細胞的沉降速度,從而使紅細胞與其它細胞分離。故而,使用 HES-TBD550(羥

乙基淀粉 550)沉淀法是一種高效的細胞分離方法。 間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 是指一群可向成骨細胞、成脂肪細胞、骨髓基質(zhì)細胞、肝臟細胞、心肌細胞和神經(jīng)細胞等多種細胞分化的多潛能組織干細胞,是在細胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工程細胞。MSCs 不僅存在于骨髓,也可從臍血、外周血中以及脂肪組織、肌肉、胎兒器官、大腦、牙齒中分離。UCB - MSCs 的分離、篩選、增殖、分化與臍血樣本的選擇、培養基的差異以及分離、擴增分化過(guò)程中操作技術(shù)等多種因素有關(guān)。目前用于 UCB - MSCs 分離的方法有:貼壁篩選法、密度梯度離心法、流式細胞儀法和免疫磁珠法。流式細胞儀法對細胞損傷較大,免疫磁珠法價(jià)格相對較貴且由于抗原抗體反應也容易改變細胞原有特性,而 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法常與貼壁篩選法結合使用,可提高所得 UCB - MSCs 的純度,目前研究多采用此法。國內不少學(xué)者采用羥乙一基淀粉沉淀紅細胞,然后再進(jìn)行離心分離單個(gè)核細胞,也取得不錯結果。實(shí)驗證明采用隨機數字表法,將每份臍血隨機分入兩個(gè)不同處理組,從而將臍血樣本的個(gè)體差異減小到zui小程度。結果證實(shí),HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法獲得的有核細胞數量明顯多于 FICOLL 密度梯度離心法。本實(shí)驗采用的羥乙一基淀粉商品名為 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550),克分子滲透壓為 308mosmL,膠體滲透壓為 6836 mmHg,可影響紅細胞集聚性沉降率。紅細胞集聚是可遞性橋接結構形成的結果,由大的 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)分子處在紅細胞之間聯(lián)接而成。HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)同時(shí)還阻礙白細胞和內皮細胞的黏附,并使平均血小板容積呈現微弱地降低,從而有輕度抑制血小板集聚的功能。臍血經(jīng) HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)處理后,可使紅細胞沉積至試管底,對其它主要成分包括干細胞無(wú)影響。經(jīng)這樣處理后,實(shí)驗時(shí)間相對較短(平均為 1.5 h),步驟相對較少,細胞污染幾率小,從而使細胞數損失減少。結論證明,與相應的干細胞分離液聯(lián)合分離使用羥乙一基淀粉沉淀法是一種高效的臍血干細胞分離方法。

10.. . . 組織單細胞懸液的制備 組織單細胞懸液的制備

注::::A.. .. 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實(shí)驗室選取的消化 酶消化法由于各實(shí)驗室選取的消化

酶種類(lèi)各不相同,,,,請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗 請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗 請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗。。。。

B. .. 全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 B. 全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境。。。。

剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過(guò)濾到試管內;離心沉淀 1500/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時(shí)低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過(guò)濾去細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。 勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內,加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉動(dòng)研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過(guò)濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。 細胞計數方法: 細胞計數法是用來(lái)計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進(jìn)行。既可用于分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用于對培養物的細胞數量進(jìn)行計數。不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。 計數與計算過(guò)程

1)、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,至

蓋玻片被液體充滿(mǎn)為止。

3)、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線(xiàn)的細胞只計數在上線(xiàn)和左線(xiàn)者,

對于細胞團按單個(gè)細胞計數。

4)、按下式計數細胞懸液的密度:

細胞密度=(4 個(gè)大格細胞總數/4)×104個(gè)/ml×稀釋倍數

公式中乘以 104因為計數板中每一個(gè)大格的體積為:

1.0mm(長(cháng))×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3 1ml1000mm3

細胞計數要點(diǎn): 細胞計數要點(diǎn):::

A 進(jìn)行細胞計數時(shí),要求懸液中細胞數目不低于 104個(gè)/ml,如果細胞數目很少要進(jìn)行離

心再懸浮于少量培養液中;顯微鏡下計數時(shí),遇到 2 個(gè)以上細胞組成的細胞團,應按單個(gè)細胞計算。如果細胞團>10%,說(shuō)明細胞分散不充分; 或細胞數<200 個(gè)/10mm2>500 個(gè)/10 mm2 時(shí),說(shuō)明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

B 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數準確性。

C 取樣計數前,應充分混勻細胞懸液,尤其是多次取樣計數時(shí)更要注意每次取樣都要混

勻,以求計數準確;

D 數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時(shí),只按照一個(gè)細胞計算。如果細

胞壓在格線(xiàn)上時(shí),則只計上線(xiàn),不計下線(xiàn),只計左線(xiàn),不計右線(xiàn)。

E 操作時(shí),注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑?,否則要重新計數。

初學(xué)者易犯的錯誤: 初學(xué)者易犯的錯誤:::

A 計數前未將待測懸液吹打均勻。

B 滴入細胞懸液時(shí)蓋玻片下出現氣泡。

C 滴入懸液時(shí)的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

11.. . . 生產(chǎn)企業(yè)

12.. . . 參考文獻

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14 朱立平,陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實(shí)驗方法.人民軍醫出版社,2000.

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