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EF03B-J2b                     2016-01版

喹諾酮類(lèi)

快速檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

一、原理

   試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物喹諾酮類(lèi)藥物和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗喹諾酮類(lèi)藥物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留喹諾酮類(lèi)藥物的含量成負相關(guān)，與標準曲線(xiàn)比較即可得出相應殘留物喹諾酮類(lèi)藥物的含量。

二、試劑盒特性

• 試劑盒靈敏度：      0.1ppb

• 孵育溫度：          25℃

• 孵育時(shí)間：          30min～15min

• 樣本檢測下限

組織 、血清 ——————————1ppb

• 交叉反應率

恩諾沙星（ENR）   ————————100%

環(huán)丙沙星（CIF）   ·————————  100%

氧氟沙星（OFL）    ·————————  60%

奧索利酸（OXO）  ·————————  116.86%

達氟沙星（DAN）  ——————————  102.63%

諾氟沙星（NOR）  ——————————  148.65%

洛美沙星（LOM）  ——————————   86.24%

培氟沙星（PEF）   ·——————————  156.60%

依諾沙星（ENO）  ——————————   98.97%

氟喹酸（FLU）    ——————————   96.73%

麻保沙星（MAR）  ·——————————110.63%

氨氟沙星（AMI）  ————————————  98.86%

那氟沙星（NAD）  ————————————   56.81%

• 樣本回收率

組織、血清 ·———————————— 85±20%

三、試劑盒組成

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）

微量移液器：?jiǎn)蔚?20～200ul、單道100～1000ul、多道 250 ul

五、樣本前處理步驟

• 樣本處理前須知

處理任何樣本時(shí)，都必須注意：

（a） 實(shí)驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。

（b） 實(shí)驗之前須檢查各種實(shí)驗器具是否干凈，必要時(shí)可對實(shí)驗器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗結果。

• 樣本前處理需配制：

配液1 樣本復溶液

將20X濃縮復溶液用去離子水按1：19（1份濃縮復溶液+19份去離子水）進(jìn)行稀釋。

• 樣本處理：

a）組織樣本處理方法

1、稱(chēng)1.0±0.05g 均質(zhì)過(guò)的組織樣本于50ml離心管中；

2、加入10ml樣本復溶液，振蕩3min，4000r/min以上，15℃離心10min；

3、取上清50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數：10

b）血清樣本處理方法

• 取50µl澄清的血清，加入450µl 樣本復溶液混合，混勻30S（如果血清樣本渾濁，將樣本于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過(guò)濾血清，直至得到澄清的樣本）；

• 取50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數:  10倍  

六、 酶標免疫分析程序:

• 測定前應須知：

• 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。

• 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。

• 在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。

• 所有恒溫孵育過(guò)程，避免光線(xiàn)照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

• 操作步驟：

• 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

• 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷凍。

• 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

• 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個(gè)樣本和標準品均需做2孔平行，并記錄標準孔的樣本孔所在的位置。

• 加標準品/樣本50µl /孔，然后加酶標記物50μl/孔，再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反應30min。

• 用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

• 顯色：每孔加入底物A液50µl再加入底物B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。

• 測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長(cháng)450/630nm檢測，在5min內讀完數據），測定吸光度值（OD值）。

七、結果判定

結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含喹諾酮類(lèi)藥物量成負相關(guān)。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標準品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.238， 樣本2的吸光度值為0.946，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.845； 0.1ppb為1.542；0.3ppb為1.130； 0.9ppb為0.635；2.7ppb為0.326； 8.1ppb為0.156。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb；樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物的實(shí)際濃度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以*個(gè)標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

（2）標準曲線(xiàn)的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標，以喹諾酮類(lèi)標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線(xiàn)中，從標準曲線(xiàn)上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。

八、 注意事項

• 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫（20-25℃）會(huì )導致所有標準的OD值偏低。

• 在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況，則會(huì )伴隨著(zhù)標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。

• 混合要均勻，否則會(huì )出現重復性不好的現象。

• 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

• 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會(huì )引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。

• 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封；標準物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。

• 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

• 該試劑盒zui理想反應溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

• 儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。

• 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實(shí)驗結果，請放心使用。

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