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蛋白雙向 電泳實(shí)驗服務(wù)
蛋白雙向 電泳實(shí)驗服務(wù)
更新時(shí)間:2023-10-27
訪(fǎng)問(wèn)量: 2973
廠(chǎng)商性質(zhì): 生產(chǎn)廠(chǎng)家

蛋白雙向 電泳實(shí)驗服務(wù)
提供商:上海研謹生物/杭州研謹生物
服務(wù)名稱(chēng):蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗服務(wù)
規格:實(shí)驗服務(wù)
價(jià)格:500元
收費標準/服務(wù)周期/提供結果:
歡迎咨詢(xún)詳談,我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
更多實(shí)驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內容,或來(lái)電詳詢(xún)!

蛋白雙向 電泳實(shí)驗服務(wù)產(chǎn)品概述:


一、蛋白雙向 電泳實(shí)驗服務(wù)實(shí)驗技術(shù)簡(jiǎn)介

2D-WB是雙向電泳與傳統western blot結合而成的一項技術(shù)。一般實(shí)驗流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過(guò)抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

二、蛋白雙向 電泳實(shí)驗服務(wù)概述

2D-WB是雙向電泳與傳統western blot結合而成的一項技術(shù)。一般實(shí)驗流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過(guò)抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

三、服務(wù)內容

1、蛋白質(zhì)抽提與定量;

2、雙向電泳;

3、轉膜,封閉,孵育,顯示成像。

四、實(shí)驗操作流程

1、第--項電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

2、第二項電泳結束后,取出凝膠進(jìn)行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(shí)(室溫)或過(guò)夜(4度)。

4、一抗孵育,根據抗體說(shuō)明書(shū)選擇孵育時(shí)間,常規的孵育條件是室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜,一抗孵育后取出膜

TBST洗滌3次,每次5分鐘。

5、二抗孵育:根據一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時(shí)后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混臺均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時(shí)間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時(shí)間需綜臺考慮蛋白質(zhì)的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時(shí)間等因素。

7、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

送樣須知,為了保證2D Western blot技術(shù)服務(wù)能順利進(jìn)行,樣品寄送需滿(mǎn)足以下要求:

1、顧客提供:組織、細胞、蛋白質(zhì)溶液等; 一抗(可交由研謹公司代購)。

2、運輸要求:干冰或液氮包裝寄送。

注:樣本應避免各類(lèi)污染和反復凍融。

五、技術(shù)服務(wù)報告內容

1、蛋白質(zhì)定量結果及電泳上樣量;

2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果;

3、2D Western blot完整的實(shí)驗報告,包括實(shí)驗步驟、使用儀器和試劑等。

附: 2D Western blot實(shí)驗步驟

1、2D Western blot蛋白質(zhì)樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質(zhì),破壞蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用,避免各類(lèi)干擾物質(zhì),樣品制備與IEF兼容等。

2、雙向電泳的主要步驟,第-項電(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

3、第二項電泳結束后,取出凝膠進(jìn)行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(shí)(室溫)或過(guò)夜(4度)。

5、-抗孵育,根據抗體說(shuō)明書(shū)選擇孵育時(shí)間,常規的孵育條件是室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、二抗孵育:根據-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時(shí)后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時(shí)間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時(shí)間需綜合考慮蛋白質(zhì)的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時(shí)間等因素。

8、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫學(xué)實(shí)驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗代做服務(wù):

 

試劑盒免費代檢測

石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光

掃描電鏡服務(wù)

實(shí)驗室代做實(shí)驗項目

 

透射電鏡服務(wù)實(shí)驗服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗服務(wù)

細胞熒光染料標記檢測實(shí)驗

 

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗代做

HE染色

六胺銀法染色實(shí)驗服務(wù)

天狼猩紅染色實(shí)驗服務(wù)

 

網(wǎng)狀纖維染色銀染實(shí)驗服務(wù)

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗服務(wù)

 

免疫組化IHC染色實(shí)驗服務(wù)

油紅O染色實(shí)驗服務(wù)

ATP/ADP檢測實(shí)驗服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗服務(wù)

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PKC活性檢測實(shí)驗

免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗

 

蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗服務(wù)

端粒酶活性檢測實(shí)驗

探針合成實(shí)驗服務(wù)

NF-KB p65活性檢測實(shí)驗

 

喹諾酮類(lèi)快速檢測試劑盒

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒


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