更新時(shí)間: | 2021-01-20 |
訪(fǎng)問(wèn)量: | 2449 |
廠(chǎng)商性質(zhì): | 生產(chǎn)廠(chǎng)家 |
提供商: 上海研謹生物服務(wù)名稱(chēng): 堿性磷酸酶染色操作流程規格: 樣本實(shí)驗周期: 3周說(shuō)明: 含包埋切片、拍照價(jià)格: 60元收費標準/服務(wù)周期/提供結果:歡迎咨詢(xún)詳談,我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內容,或來(lái)電詳詢(xún)!
堿性磷酸酶染色實(shí)驗服務(wù)
堿性磷酸酶染色實(shí)驗技術(shù)簡(jiǎn)介:
堿性磷酸酶(AKP) 的顯示方法由Gomeri (1939) 提出,現在這種方法稱(chēng)為Gomeri法。堿性磷酸酶是指磷酸單酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的條件下分解磷酸單酯,對于與磷酸相接的醇基沒(méi)有特異性,Gomeri法是讓該酶在堿性條件下,分解甘油磷酸鈉,產(chǎn)生磷酸根。
堿性磷酸酶染色實(shí)驗技術(shù)原理:
在一定條件下,使細胞中的酶作用于酶的底物,使其產(chǎn)物在原地進(jìn)行捕捉、沉淀轉化為有色產(chǎn)物。細胞組織中的堿性磷酸酶在堿性(PH9.0- 9.6)環(huán)境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚鈉)水解,產(chǎn)生出a蔡酚,然后再與偶氮鹽偶聯(lián),生成不溶性的耐曬染料(終產(chǎn)物的顏色因所用偶氮鹽的品種不同而有所不同)。
實(shí)驗操作流程:
1、取材、固定、包埋、切片;
2.取已粘好烘干的切片兩塊,放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分鐘) 的染缸中進(jìn)行脫蠟,再經(jīng)100%乙醇(一)- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水。 每級各一分鐘,在移切片時(shí),用鑷子夾住切片震蕩并提起,放下反復幾次,在移入下-染缸邊緣前稍停留。讓溶液滴凈后,再入下一染缸,以免把上一染缸溶液過(guò)多帶入下-染缸,而影響切片質(zhì)量;
3.將其中一塊切片以蠟筆作-標記(用作對照組切片),放入沸水中煮沸5分鐘;
4.將兩塊切片均放入AKP作用液中孵育30-60分鐘,作用液要事先預熱到37"C,水浴中進(jìn)行:
5、取出切片在蒸餾水中洗滌;
6、放入硝酸鈷溶液2-3分鐘;
7.蒸餾水沖洗干凈,否則切片易被污染,影響定位;
8、切片浸入硫化銨中2-3分鐘;
9.蒸餾水沖洗干凈;
10.經(jīng)各級酒精脫水。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (一),各級一分鐘在顯微鏡下觀(guān)察,細胞中有黑色沉淀存在的地方,就表明有酶的存在。煮沸的對照切片無(wú)黑色沉淀。
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